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分光光度计对核酸的定量的测定原理
分光光度计已经成为现代分子生物实验室常规仪器。常用于核酸,蛋白定量以及**生长浓度的定量。分光光度计采用一个可以产生多个波长的光源,通过系列分光装置,从而产生特定波长的光源,光源透过测试的样本后,部分光源被吸收,计算样本的吸光值,从而转化成样本的浓度。样本的吸光值与样本的浓度成正比。
分光光度计对核酸的定量的测定原理
核酸的定量是分光光度计使用频率*高的功能。可以定量溶于缓冲液的寡核苷酸,单链、双链DNA,以及RNA。核酸的*高吸收峰的吸收波长260 nm。 每种核酸的分子构成不一,因此其换算系数不同。定量不同类型的核酸,事先要选择对应的系数。如:1OD的吸光值分别相当于50μg/ml的dsDNA,37μg/ml的ssDNA,40μg/ml的RNA,30μg/ml的Olig。测试后的吸光值经过上述系数的换算,从而得出相应的样本浓度。测试前,选择正确的程序,输入原液和稀释液的体积,尔后测试空白液和样本液。然而,实验并非一帆风顺。读数不稳定可能是实验者***的问题。灵敏度越高的仪器,表现出的吸光值漂移越大。
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