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核酸蛋白酶检测试验
核酸蛋白酶检测试验
清洗层析柱。
测定层析柱的内径、高度,计算所需凝胶的体积。
根据Sephadex G-50的膨胀体积,计算所需干凝胶的质量。
称取相应质量的干凝胶,加入其总吸液量10倍的0.02 mol/L PBS。
在100℃水浴中加热溶胀1小时以上,溶胀之后将极细的小颗粒倾泻出去。
用真空干燥器抽尽凝胶中空气,并将凝胶上面过多的溶液倾出。
关闭层析柱出水口,向柱管内加入约1/4柱容积的洗脱液。
边搅拌,边将薄浆状的凝胶液连续倾入柱中,使其自然沉降。
等凝胶沉降约2-3cm后,打开柱的出口,调节合适的流速,使凝胶继续沉积。
待沉积的胶面上升到离柱的顶端约5cm处时停止装柱,关闭出水口。
通过2-3倍柱床体积的洗脱液使柱床稳定(流速0.5~1 mL/min)。
始终保护凝胶上端有一段液体。
准备好恒流泵、分部收集器、核酸蛋白检测仪及记录仪。
打开柱上端的螺丝帽塞子,吸出层析柱中多余液体直至与胶面相切。
沿管壁将5%丙酮溶液0.6 mL小心加到凝胶床面上,应避免。
将床面凝胶冲起。
打开下口夹子,使样品溶液流入柱内,同时收集流出液,当样品溶液流至与胶面相切时,夹紧下口夹子。
按加样操作,用1 mL洗脱液冲洗管壁2次。
加入3-4 mL洗脱液于凝胶上,旋紧上口螺丝帽。
将层析柱进水口连通恒流泵,柱出水口与核酸蛋白质检测仪比色池进液口相连,比色池出液口再与自动部分收集器相连,用两根导线将检测仪与记录仪连接起来,设置好基线的位置。
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