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软琼脂克隆化法具体操作过程 软琼脂克隆化法,细胞借助撒在软琼脂上单个细胞定位生长，而达到克隆化，具体操作如下： 1．配2.5%的琼脂糖30ml，水浴溶化后，移入45℃水浴中。 2．将117ml完全DMEM液和3ml10倍浓度的DMEM液混合，置45℃水浴预热。 3．将琼脂糖与DMEM液混合，即为含0.5%琼脂糖的完全DMEM液，并加75×108脾细胞。 4．每块平皿加10ml，于室温中凝固。 5．DMEM中的细胞与DMEM—琼脂1:1混合，将细胞琼脂混合物2ml铺于凝固的平板上，使其全部覆盖。 6．放入CO2箱饱和湿度，37℃培养10天。 7．用PBS配制0.6%琼脂糖，于沸水浴溶解后，置45℃，在保温情况下取一试管，迅速加入0.1ml25%羊红血球，0.2ml豚鼠补体，2.7ml0.6%琼脂糖。 8．用3ml琼脂糖—羊红血球混合液覆盖克隆。于37℃CO2箱孵育1h~2h。从克隆上部溶解羊红血球的溶血范围，可筛选抗羊红血球Ig。