蛋白质二维电泳技术原理简介

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点击量: 143729 来源: 上海创赛科技有限公司
二维聚丙烯酰胺凝胶电泳技术结合了等电聚焦技术(根据蛋白质等电点进行分离)以及SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳技术(根据蛋白质的大小进行分离)。这两项技术结合形成的二维电泳是分离分析蛋白质*有效的一种电泳手段。
通常**维电泳是等电聚焦,在细管中(φ1~3 mm)中加入含有两性电解质、8M的脲以及非离子型去污剂的聚丙烯酰胺凝胶进行等电聚焦,变性的蛋白质根据其等电点的不同进行分离。而后将凝胶从管中取出,用含有SDS的缓冲液处理30 min,使SDS与蛋白质充分结合。
将处理过的凝胶条放在SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳浓缩胶上,加入丙烯酰胺溶液或熔化的琼脂糖溶液使其固定并与浓缩胶连接。在**维电泳过程中,结合SDS的蛋白质从等电聚焦凝胶中进入SDS-聚丙烯酰胺凝胶,在浓缩胶中被浓缩,在分离胶中依据其分子量大小被分离。
对细胞提取液进行双向电泳时可分辨出1000~2000个蛋白分子,也有报道说能够分辨出5000~10000个蛋白斑点。这些报道的数据与细胞中正常存在的蛋白分子的数量很接近,因此可以说蛋白质双向电泳的分辨率较高,可以直接用于检测细胞提取物中单个蛋白分子。